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豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒

試劑盒由抗原包被板、血清稀釋板、酶標(biāo)二抗及其它試劑制成，利用間接ELISA方法檢測(cè)豬血清中存在的豬瘟特異性抗體，從而對(duì)豬瘟疫苗免疫效果作出評(píng)價(jià)。

分類：

詳細(xì)信息

豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒  Indirect ELISA Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody
使用說明書
 
【簡(jiǎn)    介】
　　試劑盒由抗原包被板、血清稀釋板、酶標(biāo)二抗及其它試劑制成，利用間接ELISA方法檢測(cè)豬血清中存在的豬瘟特異性抗體，從而對(duì)豬瘟疫苗免疫效果作出評(píng)價(jià)。
【用    途】
　　適用于豬瘟疫苗的免疫后評(píng)價(jià)及未免疫豬的血清學(xué)診斷。
【原    理】
　　本試劑盒利用豬瘟病毒的兩種主要特異性抗原組成的混合抗原包被微孔板。在試驗(yàn)中，若待測(cè)血清樣品中含有相應(yīng)的抗體，則將與檢測(cè)板上抗原結(jié)合,形成抗原-抗體復(fù)合物。之后加入的酶標(biāo)二抗將與檢測(cè)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合，并可使TMB底物溶液形成藍(lán)色產(chǎn)物。顯色反應(yīng)經(jīng)終止液終止后呈黃色，最終通過測(cè)定450nm波長(zhǎng)下吸光度得到結(jié)果。
【試劑盒主要成分】 
1 抗原包被板 2塊   96孔/塊
2 陰性對(duì)照血清 1管  50µl/管
3 陽性對(duì)照血清 1管  50µl/管
4 酶標(biāo)二抗 2管  0.2ml/管
5 25倍濃縮洗滌液 1瓶  25ml/瓶
6 底物溶液A 1瓶  10ml/瓶
7 底物溶液B 1瓶  10ml/瓶
8 終止液 1瓶  10ml/瓶
9 樣品稀釋液 2瓶  30ml/瓶
10 血清稀釋板 2塊   96孔/塊
11 說明書 1張
 
【樣品制備】
　　取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。
【試劑配制】
　　使用前，試劑盒內(nèi)除酶標(biāo)二抗外的各種試劑都應(yīng)恢復(fù)到室溫（25?C左右）。25倍濃縮的洗滌液恢復(fù)至室溫或略微加熱后搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解，然后用去離子水作25倍稀釋，稀釋好的洗滌液在2～8?C可以存放7天。酶標(biāo)二抗在使用前用樣品稀釋液按1:100倍稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用。
【樣品稀釋】
　　標(biāo)準(zhǔn)樣品與待檢樣品均在血清稀釋板中按1:50倍的體積稀釋（推薦稀釋方法：245µL樣品稀釋液中加5µL
待檢血清樣品）。
【操作步驟】 
1、取抗原包被板，先加入50µL樣品稀釋液，再將稀釋好的待檢樣品和對(duì)照樣品各取50µL加入到抗原包被板孔中，用移液器輕輕吹打混勻。陰性對(duì)照和陽性對(duì)照各設(shè)2孔，置37?C溫育30分鐘。
2、甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200µL，靜置1分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共洗3次。
3、每孔加入稀釋好的酶標(biāo)二抗100µL，置37?C溫育30分鐘。
4、甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200µL，靜置1分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共洗3次。
5、每孔加入等體積混合好的底物溶液A 與底物溶液B 100µL ，避光顯色10分鐘。
6、每孔加終止液50µL，10分鐘內(nèi)測(cè)定450nm波長(zhǎng)吸光度。
【結(jié)果判定】 
  農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《2013年國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》的通知中明確指出，豬瘟抗體正向間接血凝實(shí)驗(yàn)抗體效價(jià)≥25為合格。根據(jù)該通知制定結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：
 
1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果同時(shí)滿足下列條件，方為有效：
標(biāo)準(zhǔn)陽性對(duì)照孔平均OD450nm≥0.6±0.02。
標(biāo)準(zhǔn)陰性對(duì)照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。
2 疫苗免疫后抗體水平檢測(cè)結(jié)果的判定：
樣品OD450nm≤0.3，判為豬瘟抗體陰性。
樣品OD450nm＞0.3，判為豬瘟抗體陽性。
樣品OD450nm處于0.3±0.02臨界值范圍內(nèi)，建議重復(fù)檢測(cè)，以確保結(jié)果準(zhǔn)確。
3 對(duì)豬瘟病毒免疫保護(hù)力檢測(cè)結(jié)果的判定：
樣品OD450nm≤0.3，判為無保護(hù)力，所檢樣品對(duì)豬瘟病毒感染無保護(hù)力。
樣品OD450nm介于0.3與0.6之間，判為保護(hù)力低下，樣品抗體水平較低，對(duì)流行毒株有一定保護(hù)力。
樣品OD450nm≥0.6，判為有保護(hù)力，所檢樣品抗體水平較高，在攻毒試驗(yàn)中可提供高于90%的抵抗力。
樣品OD450nm處于0.3±0.02或者0.6±0.02兩個(gè)臨界值范圍內(nèi)，建議重復(fù)檢測(cè)，以確保結(jié)果準(zhǔn)確。
 
【注意事項(xiàng)】
1  本底過高可導(dǎo)致結(jié)果整體水平偏高，實(shí)驗(yàn)過程需保證二抗清洗干凈，或?qū)嶒?yàn)中添加空白對(duì)照。
2  環(huán)境溫度低于15?C可導(dǎo)致結(jié)果整體水平偏低，實(shí)驗(yàn)過程需保證環(huán)境溫度盡量接近25?C，或適當(dāng)延長(zhǎng)底物液顯色時(shí)間。
3  底物液A和底物液B不要暴露于強(qiáng)光，避免接觸氧化劑。 
4  濃縮洗滌液用去離子水稀釋，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，應(yīng)水浴加熱使其溶解。
5  酶標(biāo)二抗應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。
6  4?C過夜孵育樣品及酶標(biāo)二抗可以獲得更好的結(jié)果。
 
【貯  存】  2～8?C避光保存 
【有 效 期】  9個(gè)月
【生產(chǎn)企業(yè)】  重慶澳龍生物制品有限公司
【地  址】  重慶市榮昌區(qū)板橋工業(yè)園區(qū)四支路五號(hào)      
【郵  編】  402460
【技術(shù)服務(wù)】  023-46763511                
【銷售熱線】  023-46761801

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